猪星状病毒sybrgreenⅰ实时荧光定量pcr检测方法的建立与初步应用

？本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于sybrgreenⅰ实时荧光定量pcr方法。根据已报道的猪星状病毒orf2基因序列，设计并合成1对引物，通过pcr扩增orf2基因片段，将测序正确的orf2基因片段克隆入pmd18-t载体，转化大肠杆菌dh5α，经测序鉴定后得到阳性重组质粒，作为标准品模板建立sybrgreenⅰ荧光定量pcr标准曲线和熔解曲线，并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证。结果表明，猪星状病毒荧光定量pcr的标准曲线ct值与模板浓度呈良好的线性关系，熔解曲线特异，灵敏度可达1×101拷贝，是普通pcr检测方法的100倍，特异性和重复性较好。本次建立的猪星状病毒荧光定量pcr检测方法具有快速、简便、敏感等优点，有重要的实用价值。