布氏杆菌和结核杆菌二重实时荧光定量pcr检测方法的建立与初步应用

？本试验旨在利用二重实时荧光定量pcr技术建立鉴别诊断布氏杆菌和结核杆菌的方法。通过筛选布氏杆菌omp10、omp19、omp17、omp25、omp31和结核杆菌cfp10基因的最佳引物组合，建立二重实时定量pcr鉴别诊断方法，对该方法进行稳定性、特异性和敏感性试验，并对临床样品及模拟样品进行检测。经筛选布氏杆菌的omp25基因与结核杆菌cfp10基因引物组合最佳，该二重实时荧光定量pcr方法中布氏杆菌tm值为88~89℃，结核杆菌tm值为90~91℃，对其他供试的菌株则为阴性；该方法对布氏杆菌的dna最低检出量为20拷贝·μl-1，结核杆菌为50拷贝·μl-1，两病原都存在时为100拷贝·μl-1，比常规pcr高100倍。利用所建立的二重荧光定量pcr方法及常规pcr，对24份结核痰样、11份布氏杆菌基因粗提物及30份模拟奶样进行检测，符合率为100%。本试验建立的方法可用于同时检测布氏杆菌和结核杆菌，并且具有良好的特异性、敏感性和稳定性。