小反刍兽疫病毒p蛋白的表达、纯化及抗体的制备及初步应用

？本文旨在对小反刍兽疫病毒p蛋白进行原核表达，并利用表达的蛋白制备抗血清，然后用于间接免疫荧光检测。将构建好的pet-30a(+)-p重组表达质粒转化大肠杆菌构建p蛋白的原核表达体系。重组菌经iptg诱导，用sds-page电泳检测融合蛋白得到了表达。通过对表达条件的优化，确定了p蛋白在28℃、iptg诱导浓度为0.2mmol·μl-1的条件下诱导6h，可溶性p蛋白表达量最高。利用镍柱亲和层析法纯化可溶性的p蛋白，然后以纯化的蛋白为抗原免疫小鼠，制备了多克隆抗体，其滴度最高可达1∶25600，而且特异性好，表明获得了p蛋白的多克隆抗体。同时利用所制备的抗体对pcdna3.1/p真核表达进行了间接免疫荧光检测。p蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达，并制备了特异性好、滴度高的抗血清，为研究p蛋白功能奠定了基础。