猪霍乱沙门氏菌c78-1株δcrp缺失株的构建及其生物学特性初步研究

？通过自杀性质粒介导的等位交换技术构建猪霍乱沙门氏菌c78-1株的crp基因缺失株，并对其生物学特性进行初步研究。首先以猪霍乱沙门氏菌c78-1基因组为模板进行pcr，扩增出crp基因上下游片段（1048和1743bp），并分别将其克隆入自杀性质粒pre112上，构建含缺失320bpcrp基因的重组自杀性质粒preδcrp。运用重组自杀性质粒介导的等位交换技术，两步法筛选c78-1的δcrp缺失株。进一步的生物学特性研究表明，缺失株的血清型与亲本菌株c78-1一致，且能够稳定遗传缺失的crp基因，但其生化特性和生长速度与c78-1相比发生明显改变，小鼠致死性试验结果表明其毒力较c78-1降低约750倍。以上结果均证实，作者成功构建了猪霍乱沙门氏菌c78-1株的crp基因缺失突变株，缺失株遗传稳定，毒力显著降低，为进一步开发猪霍乱沙门氏菌的弱毒疫苗菌株奠定了基础。