tnf-α在ifn-γ诱导的感染牛分枝杆菌的thp-1细胞凋亡过程中的作用及相关信号通路分析

？为研究ifn-γ对感染牛分枝杆菌的thp-1细胞的促凋亡作用，及tnf-α在此细胞凋亡过程中的作用和相关信号分子的变化，使用浓度为15ng·ml-1的ifn-γ作用于不同剂量牛分枝杆菌北京株（moi10∶1，20∶1）感染的thp-1细胞，在感染后12、24、36、48和72h，使用流式细胞仪测定细胞凋亡百分比。结果显示，ifn-γ诱导了m.bovis北京株感染的细胞凋亡，并且凋亡呈时间相关性。随着细胞凋亡百分比的增加，牛分枝杆菌的cfu降低。在ifn-γ和m.bovis北京株（moi10∶1）处理的巨噬细胞内加入抗tnf-α单克隆抗体，感染后36h，细胞凋亡百分比测定结果显示，加入抗tnf-α单抗抑制了ifn-γ诱导的m.bovis感染的thp-1细胞的凋亡，与对照组相比，差异显著（p<0.05）；用分光光度计检测表明caspase-3和caspase-8的激活是tnf-α依赖性的。在ifn-γ和m.bovis北京株（moi10∶1）作用的thp-1细胞内分别加入jnkinhibitori或nemo-bindingdomainbindingpeptide，或同时加入2种抑制剂，36h后测定细胞凋亡情况，与对照组相比，加入抑制剂后，细胞凋亡无显著差异（p>0.05），说明在本试验中，jnk通路和nf-κb凋亡通路未被激活。本研究初步阐明了tnf-α在ifn-γ诱导的感染牛分枝杆菌的细胞凋亡过程中的作用及相关信号通路。