猪繁殖与呼吸综合征病毒一步多重rt-pcr检测方法的建立及应用

？本研究旨在建立猪繁殖与呼吸综合征病毒（prrsv）的一步多重rtpcr检测方法。通过多序列比对以及反应条件的优化，从4对引物中精选了3对特异性和敏感性较好、扩增片段分别为228、345和490bp的引物，并应用所建立的方法对4种分离株的细胞毒和组织毒、田间样品及临床症状相似的疾病猪瘟和猪伪狂犬病毒做了检测；并对田间及实验室样品进行符合率试验，对阳性样品进行重复性试验。与常规rtpcr法进行比较，证明该方法比常规rtpcr法敏感性提高了10倍；而且利用该方法可使检测时间大大缩短；特异性试验证实该方法无交叉反应；阳性和阴性样本的符合率均为100%；3次阳性样品重复性检测结果完全相同；稳定性试验显示该试剂盒至少可保存1年以上。本研究所建立的prrsv一步多重rtpcr检测方法的敏感性高、特异性强、操作简便、省时、结果重复性好，不仅适用于临床病例尤其低微含量样品的诊断，而且在筛查隐形带毒动物及兽医检疫方面具有重要的应用价值。