fmdv2a介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达

？构建fmdv2a介导的人白细胞介素2基因（hil2）和增强型绿色荧光蛋白（egfp）基因双顺反子乳腺特异性表达载体，并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β酪蛋白启动子序列，将hil2基因序列置于启动子之后，然后利用口蹄疫病毒2a（fmdv2a）自剪切序列连接egfp基因，构建出乳腺特异性的双顺反子表达载体pfienβ，并利用脂质体转染山羊乳腺上皮细胞，然后用rtpcr技术和westernblot检测hil2基因与egfp基因的表达。重组质粒pfienβ经酶切鉴定后表明构建成功，转染质粒pfienβ和pegfpc1的细胞均观察到绿色荧光；从转染pfienβ的乳腺上皮细胞中扩增出hil2基因和egfp基因，而转染pegfpc1的细胞中只扩增出egfp基因；经westernblot检测，转染pfienβ的细胞中均表达了hil2和egfp蛋白。结果表明山羊β酪蛋白启动子能同时启动hil2基因和egfp基因在山羊乳腺上皮细胞中的表达，并且利用fmdv2a元件实现了hil2基因和egfp基因的非融合型表达。