myostatin基因沉默绵羊成纤维细胞系的建立

？旨在获得肌肉生长抑制素（myostatin，mstn）基因沉默的成纤维细胞系，为进一步探索myostatin的调控机理，获得myostatin的基因沉默的转基因羊奠定基础。针对小尾寒羊myostatin的基因序列，设计4条sirna干扰序列，构建psilencer干扰载体，转染成纤维细胞，采用rtpcr进行筛选；构建慢病毒干扰载体，包装病毒，感染成纤维细胞，采用流式细胞技术分选阳性细胞，阳性细胞予以测序鉴定并检测沉默效果。结果，获得myostatin基因沉默效率约90%的rna干扰片段psl1，包装病毒获得滴度为1×108的病毒颗粒，流式细胞技术分选得到纯度达99%的myostatin基因沉默成纤维细胞系。采用慢病毒感染接合流式细胞术分选，能较快获得无抗性标记的转基因阳性细胞系，为培育myostatin基因沉默的转基因羊及探索myostatin的调控机理奠定基础。