鸭β-防御素4cdna的克隆、表达及其抑菌活性的初步分析

？本研究旨在克隆与表达鸭β防御素4（avbd4）基因及测定其生物学特性，并检测其在鸭脏器组织中的分布。采用rtpcr方法从鸭法氏囊组织中扩增到鸭avbd4，其cdna大小为171bp，编码56个氨基酸。经同源性分析，鸭avbd4与鸡avbd4的氨基酸序列同源性最高，达73.2%。将该基因亚克隆到原核表达载体pgex6p1的ecorⅰ和salⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pgexduckavbd4。将重组质粒转化大肠杆菌bl21，于37℃进行诱导表达，sdspage电泳表明，重组鸭avbd4蛋白的相对分子质量约为32ku，与预期大小一致。该重组蛋白经纯化后测定其体外抗菌活性与理化特性，结果显示，重组鸭avbd4蛋白具有广谱的抗菌活性，对11种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌作用。在高盐离子条件下，重组鸭avbd4蛋白仍具有抑制金黄色葡萄球菌和多杀性巴氏杆菌的作用。此外，该重组蛋白的溶血活性极低。运用实时荧光定量pcr法检测到该基因在鸭组织器官中表达局限，仅在盲肠扁桃体、脾脏和法氏囊中表达。