应用酵母双杂交系统初步筛选ibdvvp2结合蛋白

？用rtpcr扩增vp2cdna并克隆入诱饵载体psos，与鸡法氏囊cdna文库中分离的质粒dna共转化cdc25h，筛选阳性酵母克隆；用酵母质粒dna转化大肠杆菌，提取质粒再分别与诱饵载体psosvp2共转化酵母细胞，利用酵母双杂交系统对阳性克隆进行验证。对阳性克隆的插入片段进行序列分析，根据生物信息学分析结果初步确定ibdvvp2结合蛋白编码基因。结果显示，经酵母双杂交共筛选出48个候选阳性克隆，分别转化酵母菌，经酵母双杂交验证后，获得阳性克隆19个。进一步的序列分析显示，在19个插入序列中，共编码8种不同的多肽，分别是ras超家族中的rras2、rit1和nras，肿瘤相关蛋白tctp和parp14，抗病毒mx蛋白，lamb3蛋白以及蛋白激酶prkx。vp2候选结合蛋白的获得为ibdv受体、诱导细胞凋亡或逃逸宿主抗病毒机制等研究奠定了基础。