牛myog基因启动子的克隆及功能的初步分析

？本研究旨在比较日本和牛myog基因的不同长度片段启动子的活性强弱并初步探讨其中的机制。根据genbank已公布的牛myog基因的启动子序列，设计特异性pcr引物扩增日本和牛myog基因的一系列启动子缺失序列，构建重组克隆载体pmd18tmyogpro，对阳性克隆进行限制性酶切鉴定、测序及生物信息学分析，进而构建一系列启动子缺失片段的pgl3myogpro双荧光素酶表达载体，转染牛肌源干细胞（mdscs）和牛胎儿成纤维细胞，并进行双报告基因活性检测。结果表明，日本和牛myog基因的166~2125bp启动子都能不同程度的启动双荧光素酶报告基因在牛肌源干细胞中的表达，且具有肌肉特异性。通过生物信息学分析得知日本和牛myog启动子序列中有1个tata盒，15个ebox，并可能含有myod、mef2、mef3、mtbf、tef1、prdf、sp1、多个srf、ere、gre及多个oct1等转录因子调控结合位点，本试验通过比较不同长度启动子片段的活性并结合对上述转录因子的分析，认为这些转录因子可能对启动子活性起着重要的调控作用。对牛myog基因启动子的克隆与功能和序列分析为进一步研究myog基因的表达调控奠定了基础。