弓形虫微线体蛋白mic3基因的克隆及原核表达

？根据编码mic3的已知基因序列设计并合成一对引物，应用pcr技术从弓形虫rh株的基因组dna中扩增编码mic3的全长基因，克隆入pgex-kg表达载体，转化入e.colidh5α感受态细胞，经含氨苄青霉素琼脂平板筛选，小量抽提质粒进行酶切、pcr及dna测序鉴定。然后阳性重组质粒转化入e.colibl21-codonplus，iptg诱导，表达产物经sds-page和western-blot分析鉴定。结果显示，扩增的mic3基因与genbank中相应基因序列(aj132530)的同源性达99.6%，表达的mic3融合蛋白表观分子量约为66ku，且可被兔抗弓形虫免疫血清识别。说明所获得的表达蛋白质具有一定的反应原性，为下一步利用重组蛋白建立弓形虫的诊断方法和研制弓形虫的亚单位疫苗奠定了基础。