免疫外科法分离山羊囊胚内细胞团的研究

？分别用关中奶山羊脾脏细胞和胎儿成纤维细胞，免疫新西兰白兔各2只，共4只。通过3次静脉注射，每次注射4×108个细胞，间隔10d，最后一次注射10d后心脏采血制备抗血清，结果获得的4份抗血清均具有细胞毒性，由脾脏细胞免疫获得的抗血清溶解细胞的效价稍高。超排关中奶山羊24只和波尔山羊3只，6～9d采胚共获得胚胎240枚，其中囊胚106枚，结果显示配种后7～9d胚胎的发育阶段适宜于分离内细胞团（icm）。细胞毒性试验表明，抗血清对关中奶山羊红细胞、囊胚和波尔山羊囊胚均具有细胞毒性作用。通过比较抗血清50％溶解山羊红细胞效价与溶解囊胚滋养层细胞效价的差异，发现后者的适宜效价是抗血清50％溶解山羊红细胞效价的22～23倍，表明采用易于获得的山羊红细胞作预试验可以为免疫外科分离山羊icm提供抗血清稀释比例参考。免疫外科法分离icm采用两步法进行，获得最佳参数如下：抗血清稀释比例为1∶4～1∶15，补体稀释比例为1∶20，先在抗血清中作用30min，再在补体中作用20～30min，吹打除去溶解的滋养层细胞后即可获得icm。分离得到的icm形态特征与胚胎质量密切相关。山羊icm接种于丝裂霉素处理过的小鼠胎儿成纤维细胞饲养层后，2d内贴壁。4～7d后，icm增殖为胚胎干细胞样集落，其周围出现大量空泡样细胞。