检测牛分枝杆菌的噬菌体生物扩增法的建立及初步应用

？建立噬菌体生物扩增法（phab）检测牛分枝杆菌,将建立的方法用于22株牛分枝杆菌临床分离株及20种常见非结核分枝杆菌（ntm）及5种非分枝杆菌，同时对203头疑患牛结核病奶牛的奶样进行检测，其结果与皮内变态试验、涂片法、罗氏培养进行比较。结果表明，噬菌体工作浓度为1×109pfu/ml、37℃感染2h为最佳检测条件;杀毒剂浓度为100mmol/l，室温作用10min即可完全杀灭受试噬菌体；加热灭活的细菌和指示细菌不被噬菌体感染；牛分枝杆菌、耻垢分枝杆菌和22株牛分枝杆菌临床分离株检测结果均为阳性，16种ntm和5种非分枝杆菌为阴性，4种ntm（偶然、胞内、金色、草分枝杆菌）在高浓度时（>105cfu/ml）检测结果为阳性;该法可检测出60~120cfu/ml牛分枝杆菌;批内、批间变异系数均小于15%，重复性良好;203头检测奶牛中，phab法、涂片法、皮内变态试验和罗氏培养结果分别有14头（6.9%）、17头（8.4%）、21头（10.3%）和12头（6.0%）为阳性，phab法与其他3种方法比较，阳性准确性、特异性都在96%以上，敏感性在71％～100%。该法检测牛分枝杆菌具有快速、简便、灵敏、特异性高等特点。