柔嫩艾美耳球虫子孢子cdna表达文库的构建

？在无rnase污染的环境下，提取柔嫩艾美耳球虫（eimeriatenella）子孢子rna，进而纯化mrna，采用oligo（dt）引物反转录合成cdna第一链和第二链，并在其两端加ecorⅰ/hindⅲ定向接头。将所产生的cdna分子定向克隆到具有ecorⅰ/hindⅲ黏性末端的λscreen载体的两臂之间。用phagemakerextract对以上连接产物进行体外包装，形成完整的噬菌体，并用该噬菌体转染大肠杆菌er1647，进行文库容量测定和扩增。以扩增文库的dna为模板，利用已知基因引物克隆e.tenella3-1e基因，并进行测序。结果表明，成功构建了e.tenella孢子化卵囊子孢子的cdna文库，文库原始库容量约为4×106pfu/ml，插入片段约100～3000bp，扩增得到特定的e.tenella3-1e基因，说明文库质量高、代表性强，为进一步从文库中筛选相关基因提供了有效的工具。