猪蛔虫感染期幼虫抑制消减cdna文库的构建

？为筛选与线虫感染性相关的基因，本研究以猪蛔虫为对象，构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cdna文库，为研究线虫期特异性发育的分子机制奠定基础。分别提取感染期幼虫和其它各期幼虫及成虫的总rna，纯化mrna后，采用clontech公司pcr-selecttm试剂盒进行反转录合成cdna并进行抑制消减杂交（ssh），构建猪蛔虫感染期幼虫差异表达的消减cdna文库，并采用southern斑点杂交进行消减效率的检测。随机从文库中抽取45个克隆进行测序及在线blast分析。试验结果表明，感染期幼虫差异表达的消减cdna文库具有较强的特异性；在得到的41个表达序列标签（ests）中，有40个ests与已报道的基因有较高的相似性，主要代表猪蛔虫第三期幼虫基因和成虫头部基因，有1个cdna片段可能代表新基因。猪蛔虫感染期幼虫差异表达消减cdna文库的成功构建，为进一步研究幼虫发育差异表达基因的功能奠定了基础。