猪瘟病毒实时荧光定量rt-pcr的建立及其对人工感染猪体内猪瘟病毒的检测

？本研究应用猪瘟病毒通用引物和野毒特异性taqman探针，并以质粒作为阳性标准品，结合corbett公司的rotorgene3000荧光定量pcr仪，建立了一种敏感、特异、重复性好的快速检测猪瘟病毒核酸载量的taqman荧光定量rt-pcr方法。该方法在108~101范围内具有良好的线性关系，可检测到初始模板中10拷贝/μl的病毒核酸，与本实验室建立的rt-套式pcr（rt-npcr）具有相近的敏感性，二者对152份不同样品检测符合率达94.7%。应用本方法对人工感染106tcid50猪瘟石门强毒的猪只感染后0~14d全血中猪瘟病毒rna进行了定量检测，揭示了猪瘟病毒在猪体内复制的动态变化，证实了感染猪临床表现与病毒滴度存在明显的时间相关性。此外发现，在同居感染猪出现猪瘟临床症状前3~4d可从其全血中检出病毒rna。