鸡ppar-γ基因表达载体构建及抗血清制备

？为构建鸡ppar-γ基因的原核和真核表达载体并制备鸡ppar-γ的抗血清，根据鸡ppar-γ基因cdna序列设计一对引物，采用rt-pcr的方法扩增鸡ppar-γ基因的cdna片段并将其分别插入到原核表达载体pgex-4t-1和真核表达载体pcdna3中；进而诱导重组原核表达载体pgex-4t-1/ppar-γ在大肠杆菌bl21中表达；同时利用重组真核表达载体pcdna3/ppar-γ免疫注射小鼠使其产生免疫应答。sds-page结果显示pgex-4t-1/ppar-γ在大肠杆菌bl21中得到了高效的表达。elisa和westernblot结果表明，pcdna3/ppar-γ免疫小鼠产生了效价较高和特异性较强的抗体。本研究所构建的真核表达载体pcdna3/ppar-γ为在细胞水平上研究鸡ppar-γ基因超表达提供了有力的工具；所获得的重组蛋白和抗血清为在蛋白水平上研究鸡ppar-γ基因的功能奠定了基础。