猪β-干扰素在毕赤酵母中的分泌表达及其活性

？为了高效表达分泌型的猪β-干扰素，将去除信号肽的编码梅山猪β-干扰素成熟多肽基因（mpoifnβ）插入酵母－大肠杆菌穿梭载体ppic9k，构建成分泌型重组表达载体ppic9k-mpoifnβ。将以salⅰ线性化的ppic9k-mpoifnβ用化学方法(licl)，与鲑鱼精dna(ssdna)共转化入毕赤酵母菌株gs115，转化子经md平板筛选和pcr鉴定后获得阳性菌株，再经高浓度g418筛选到多拷贝菌株。以1%甲醇连续诱导4天，sds-page和westernblot检测结果表明：表达产物为22kd和26kd的混合物，在gs115中的表达量约为80mg/l，占分泌型总蛋白的29.4%–30.8％，表明猪β-干扰素基因在毕赤酵母中获得了高效分泌表达。对表达产物进行理化分析发现，重组酵母菌表达的蛋白耐酸(ph2)，对热(56℃)部分敏感，并能被特异性的抗猪β-干扰素抗体中和而不与抗猪γ-干扰素抗体反应。以细胞病变抑制法(cpe50)测定干扰素抗病毒活性，在mdbk（牛肾细胞系）中表达的猪β-干扰素的抗vsv比活性达到2.0×106u/mg；对口蹄疫病毒在ibrs-2细胞中的增殖也有明显的抑制作用。