载体介导的shrna抑制猪瘟病毒在pk-15细胞中增殖特性的研究

？利用生物学软件分析猪瘟病毒基因组ns3基因，设计针对ns3基因不同位置的干扰序列，化学合成这些序列，然后退火连接为双链干扰片段，再定向克隆到干扰载体中，将酶切和序列测定鉴定正确的重组载体命名为pgene-ns3-1、pgene-ns3-2、pgene-ns3-3、pgene-ns3-negative。重组干扰载体经纯化后转染pk-15细胞，并进行g418抗性筛选。克隆细胞扩大培养后，接种猪瘟病毒shimen株，收集细胞的分别进行实时定量pcr和elisa光吸收度分析。real-timepcr分析表明：pgene-ns3-1、pgene-ns3-2、pgene-ns3-3转录产生的shrna分子与对照细胞比较，均在一定程度上沉默了病毒的mrna，抑制率约为63%、46%、49%。elisa检测结果表明：转染pgene-ns3-1、pgene-ns3-2、pgene-ns3-3重组载体的pk-15细胞均在不同程度上抑制了猪瘟病毒粒子的增殖。