禽病原性大肠杆菌tsh突变株的构建及分离株tsh基因的检测

？运用基因重组方法将庆大霉素抗性基因(gentamycin,gm)连接到pcr扩增的tsh两端区域产生的2个目的基因片段之间，并共同插入到puc18载体的多克隆位点中，构建出带gm标志的载体puc18-tshfrgm，从中切下此3个片段，再将之克隆到pmeg-375自杀性载体中，构建出自杀性载体pmeg375-tshfrgm，将突变载体转化到含tsh基因的受体apece037株中，根据同源重组原理，筛选出tsh基因缺失的e037突变株，命名为e037(δtsh)。e037和e037(δtsh)株的ld50分别为105.6cfu和109.0cfu，动物感染性试验表明e037(δtsh)株在内脏器官和血液中的感染能力和大肠杆菌病变程度均有了明显下降。在243株禽源分离株中，有167株为tsh+菌株，其中高致病株、中等致病株和低致病株分别为87.4%(146/167)、12.6%(21/167)和0%(0/167)；o1、o2和o78血清型的高致病株占所在血清型分离株的89.5%~100%，而其它血清型的高致病株仅占其它分离株的53.3%，差异极显著(p<0.01)。结果显示tsh+株大多数为高致病性菌株，且其致病性与血清型的种类有一定的相关性，温度敏感性血凝素为apec重要的致病因子。