基于rna复制子ghrh基因表达载体的构建及在293细胞中的表达

？本研究将ghrh基因克隆到塞姆利基森林病毒（sfv）复制子质粒型表达载体pcmv-rep-lacz，构建了真核表达载体pcmv-rep-ghrh。采用脂质体介导将表达质粒pcmv-rep-ghrh转染293细胞，经rt-pcr、ifa、tricine-sds-page和westernblot检测，证明表达质粒pcmv-rep-ghrh在293细胞中正确地表达了ghrh多肽分子。本研究还利用放免法检测质粒载体转染细胞培养上清中ghrh浓度，初步比较了rna复制子载体pcmv-rep-ghrh和普通载体（pires-ghrh和pcdna3-ghrh）的表达效率，结果表明，转染后48h，rna复制子载体表达ghrh的含量显著高于普通载体，分别比pires-ghrh和pcdna3-ghrh高出36.12%（p<0.05）和67.94%（p<0.05）。结论：构建的真核表达载体pcmv-rep-ghrh能够在真核细胞293中表达ghrh多肽分子，且表达水平显著高于普通载体，为下一步更好地调控动物生长以提高动物生产性能打下基础。