鼠源性抗雄性特异性抗原噬菌体fab抗体库的构建

？利用雄鼠脾细胞免疫6～7周龄c57bl/6雌鼠，加强免疫后取脾细胞，trizol法提取细胞总rna，并逆转录合成cdna第一条链。以其为模板，利用特异性ig基因的引物pcr扩增出重链fd片段和κ链基因，并将扩增出基因重组到噬质粒载体pcomb3中，重组噬质粒转化大肠杆菌xl1-blue中，分别构建κ链基因库和抗体fab段基因库。分别经蓝白斑筛选，计算转化效率，通过pcr反应和双酶切反应鉴定抗体库的重组率，轻链、重链fd段基因的重组率均为80%。抗体fab段基因库经过辅助噬菌体vcsm13超感染，成功构建了鼠源性噬菌体fab抗体库，并测定噬菌体抗体库的库容和滴度，结果分别为1.5×107，3.2×1011pfu/ml。对噬菌体抗体库的18个克隆进行elisa分析,结果显示以雄鼠脾细胞作为抗原时，有9个克隆含有雄性特异性的噬菌体抗体，而以雄鼠睾丸细胞作为抗原时，有8个克隆与睾丸细胞呈现结合活性。噬菌体抗体库的构建为雄性特异性抗原的鼠源性噬菌体抗体fab片段的筛选及其应用、雄性特异性抗原和抗体功能性分子基础的研究奠定了坚实基础。