马白细胞介素18成熟蛋白（meil-18）基因在大肠埃希氏菌中的高效表达与纯化

？用rt-pcr从经cona刺激的马外周血单个核细胞(pbmc)中扩增出马白细胞介素18(equineinterleukin-18,eil-18)前体蛋白(precursoreil-18,peil-18)基因的cdna，然后克隆至载体pcr2.1-topo中，鉴定并命名为pcr2.1-peil-18。自pcr2.1-peil-18中扩增马白细胞介素18成熟蛋白(matureeil-18,meil-18)基因，并将其亚克隆至原核表达载体pet-28a(+)中。将筛选出的阳性克隆进行测序、诱导表达及其表达产物纯化。结果表明，meil-18基因全长474bp，含1个开放阅读框，编码157个氨基酸的成熟蛋白；表达产物以可溶性和包涵体两种形式存在，经sds-page和western-blot分析，重组蛋白相对分子量约为20ku，且具有免疫生物学活性。meil-18基因在大肠杆菌中高效表达并在非变性和变性条件下采用ni+亲和层析纯化方法获得了高纯度的重组meil-18,为探究马白细胞介素18的生物学活性及其应用奠定了基础。