巴马小型猪sla-2和β2m复合体蛋白的构建及二级结构测定分析

？以巴马小型猪为研究材料，克隆sla-2和β2m基因。然后采用剪接重叠延伸pcr（splicingoverlapextentionpcr,soepcr）法，将sla-2的胞外区和β2m的成熟肽部分通过一富含甘氨酸/丝氨酸的linker(g4s)3连接，形成sla-2-linker-β2m全长。将sla-2-linker-β2m在pmal-p2x系统上表达，其融合表达蛋白分别经过western-blot、纯化及factorxa切割，分离纯化单体蛋白。圆二色谱(circulardichroismspectrum,cd)测定蛋白的二级结构。结果显示，重构表达的复合体融合蛋白mbp-sla-2-(g4s)3-β2m大小为84.1ku。切割后去除mbp的单体蛋白大小为41.6ku。圆二色谱分析单体蛋白和融合蛋白二级结构元件α-螺旋、β-折叠、转角和随机卷曲的符合率分别达到了100%、97.3%、97.1%和97.9%，揭示重构的复合体具有正确的二级结构，可以用于体外多肽结合等研究。