共表达鹅细小病毒vp3-gil2重组乳酸杆菌的构建及其口服免疫评价

？笔者拟构建共表达鹅细小病毒(gpv)vp3和鹅白细胞介素-2(il-2)的分泌性重组乳酸杆菌，评价口服表达融合蛋白gpvvp3-gil2的重组乳酸杆菌的免疫效果。通过酶切将vp3基因和il-2基因连接，并在其5′端连入乳酸杆菌的信号肽基因sp，亚克隆到乳酸杆菌整合表达载体pmj67，电转化入干酪乳杆菌l.cect5276，sds-page和westernblot法鉴定重组菌gpvvp3-gil2融合蛋白的表达活性。将重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅后检测血清gpv抗体、小肠黏液siga和脾淋巴细胞增殖情况，评价其免疫效果。结果表明，酶切和测序结果表明成功构建重组表达载体pmj-sp-gpvvp3-gil2，pcr证实质粒pmj-sp-gpvvp3-gil2成功整合到乳酸杆菌基因组；westernblot表明重组乳酸杆菌分泌表达的融合蛋白gpvvp3-gil2能与gpv阳性血清特异性结合；淋巴细胞增殖试验表明口服重组菌后能特异地刺激脾淋巴细胞增殖，且在第4、5、6周明显高于gpvvp3组和gil2组；重组乳酸杆菌口服免疫雏鹅可以产生抗vp3蛋白抗体，且具有中和活性的抗体显著高于gpvvp3组；小肠黏液siga细胞生成的数量自第2周较gpvvp3组和疫苗组显著上升。动物攻毒试验结果显示gpvvp3-gil2融合蛋白免疫组能够获得85%的保护率，表明所构建的重组乳酸杆菌口服后对gpv的攻击具有较好的免疫保护作用。本试验成功构建能稳定表达gpvvp3-il2融合蛋白的口服乳酸杆菌工程菌，为研究其作为口服疫苗奠定了基础。