褪黑素对小鼠卵母细胞氧化应激及孤雌发育的影响

？通过小鼠卵母细胞自发成熟体外培养模型研究了褪黑素（mt）对外源性h2o2刺激的小鼠卵母细胞体外成熟及其孤雌发育的影响。结果表明：(1)随着h2o2剂量依赖性的增加，卵母细胞pb1的排出率下降,当增加h2o2（>250μmol·l-1）时，显著下降（19.4%vs.92.0%,p<0.05）；(2)培养液中添加mt（0.1、1.0、10.0ng·ml-1）后均能阻止h2o2的抑制作用，其中10.0ng·ml-1的mt作用效果显著（p<0.05）；(3)取gv期卵母细胞经h2o2(500μmol·l-1)和mt（0.000、0.001、0.010、0.100ng·ml-1）联合培养后孵育在2′,7′-二氯荧光素二乙酸酯（dcf-da）中，荧光显色表明，mt清除了由于h2o2引起的细胞内大量的活性氧（reactiveoxygenspecies,ros），其中0.100ng·ml-1的mt效果最显著（p<0.05）,极大程度的降低了氧化应激损伤，提高了成熟率；（4）统计卵母细胞孤雌激活后的发育情况，mt浓度为10-9~10-3mol·l-1组培养的孤雌胚2-细胞发育情况无显著差异(88.2%、91.4%、91.8%、88.8%vs.88.1%,p>0.05)，mt浓度为10-7~10-3mol·l-1组的4~8-细胞率差异显著(58.8%、73.8%、43.6%vs.23.4%,p<0.05)，mt浓度为10-9~10-5mol·l-1均明显促进囊胚发育（24.6%、46.6%、49.2%vs.8.0%,p<0.05）。氧化应激对卵母细胞的成熟是不利的，mt保护了卵母细胞免受氧化应激的影响，mt浓度为10-5mol·l-1为卵母细胞孤雌发育能力的最适浓度。由此可推出mt作为细胞内的自由基清除剂，可能是提高卵母细胞和胚胎质量的重要条件之一。