整合型诱导表达猪生长激素（pgh）载体的构建及表达研究

？？旨在构建整合型诱导表达猪生长激素（porcinegrowthhormone，pgh）载体，在细胞水平验证其诱导效率及表达效率。从ptre-gh12载体上扩增tre-gh片段，通过sali酶切位点连接到pcaggs-rtta载体中，构建重组载体pcaggs-rtta-tre-gh12（下称pttgh），将pttgh质粒转染猪pk15细胞，经g418筛选后，在培养液中添加诱导底物强力霉素（doxycycline，dox）后不同时间段通过实时荧光定量pcr（qrt-pcr）测定细胞内pghmrna的表达；在培养液中添加不同浓度的的dox，通过qrt-pcr及westernblot测定细胞内pgh的表达变化。酶切及测序结果表明成功构建了pttgh载体；qrt-pcr结果表明，和对照组相比，试验组细胞培养液中添加诱导底物后外源gh基因表达在36h时最高；在一定浓度范围内，外源gh表达水平和添加dox的浓度呈现出正相关性，而正常细胞组中gh的表达水平不受dox添加与否及量的影响。通过条带灰度分析western杂交结果验证了培养基中一定范围内dox浓度和pgh表达量呈现出正相关。试验结果表明，本研究成功构建了整合型诱导表达gh载体并能实现gh的可控表达，本研究为以后制备可控表达gh转基因动物、进一步研究gh对机体影响奠定基础。