猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞中非结构蛋白nsp2表达分析

？猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus，prrsv)非结构蛋白nsp2对病毒复制和致病具有重要作用，本研究旨在分析nsp2在marc-145细胞内的分布与表达。构建nsp2含pl2区域基因片段的原核表达载体，重组蛋白纯化后作为免疫抗原，制备nsp2特异性单克隆抗体。将携带nsp2基因的真核表达载体转染至marc-145及hek293细胞，或将prrsv感染marc-145细胞后不同时间点收集细胞样品。免疫荧光观察nsp2在转染细胞中的亚细胞定位，免疫印迹分析nsp2在真核细胞中的表达。筛选获得了1株稳定分泌特异性抗nsp2的单克隆杂交瘤细胞株，能用于免疫荧光和印迹分析。重组真核表达质粒转染marc-145与hek293细胞后，nsp2主要定位于细胞质中，免疫印迹检测到约为120与50ku的蛋白条带。prrsv感染marc-145细胞4h即可检测到nsp2的表达，主要定位于细胞核周围，随着感染时间延长nsp2分布范围逐渐扩大至整个细胞质。病毒感染8h，可检测到120ku左右的nsp2蛋白条带，感染后12h可检测到70和50ku左右的nsp2蛋白，且蛋白表达量随感染时间延长显著增多。prrsv感染细胞中nsp2的表达与剪切分析，为深入研究该蛋白在病毒复制和致病中的功能奠定了基础。