表达猪流行性腹泻病毒coe基因的重组乳酸菌的构建与鉴定

？用疑似患猪流行性腹泻病（ped）的病猪肠病料，根据猪流行性腹泻病毒（pedv）s糖蛋白基因设计引物进行rt-pcr扩增，获得531bp的pedv部分保护性抗原基因，将其克隆入pmd18-t载体后测序，核苷酸序列与pedvcv777株相应序列的同源性为99.4％。根据测序结果和表达载体特点，设计一对引物，扩增pedv部分保护性抗原基因（coe基因）501bp片段。将coe基因与乳酸乳球菌表面表达载体pnz8149进行连接，电击转化入食品级乳酸乳球菌nz3900细胞。重组菌以1ng/ml乳链菌肽（nisin）诱导，通过sds-page和westernblot分析，pedv部分s蛋白成功表达，并具有反应原性。间接免疫荧光试验表明，重组菌表达蛋白定位于菌体细胞表面。