氟苯尼考耐药菌的构建及大肠杆菌中flor蛋白定位

？通过对flor基因序列的分析，将扩增的包含flor基因上游调控序列及下游终止序列的约1550bpdna片段克隆到pgem-teasy载体上，成功构建了pgem-flor质粒，将质粒转入jm109中，药物敏感性试验显示构建的pgem-flor/jm109基因工程菌对氯霉素和氟苯尼考高度耐药，对四环素和庆大霉素敏感。本试验成功构建了一个基因背景清楚且对氟苯尼考耐药的细菌模型，排除了细菌中其他氟苯尼考耐药基因或泵出蛋白对flor基因贡献细菌耐药表型及进一步试验的影响。分别提取cvm1841、pgemflor/jm109、pgem/jm109和jm109膜蛋白，运用实验室制备的鼠抗gst-flor1抗体进行免疫印迹反应，蛋白定位显示flor蛋白位于细菌的细胞膜上。本试验结果证实flor基因编码的蛋白位于细胞膜，并贡献细菌对氯霉素和氟苯尼考的交叉耐药性。