重组鸡抗菌肽gallinacin-9的原核表达及其抗菌活性的鉴定

？采用rt-pcr方法，从鸡舌组织中扩增到gallinacin-9（gal-9）基因，测序表明gal-9为201bp，其成熟肽由67个氨基酸残基组成。进一步将克隆的gal-9基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体pgex-6p-1的ecorⅰ和salⅰ双酶切位点上，构建重组表达质粒pgex-gal-9，经序列分析鉴定确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌bl21，于37℃诱导培养不同时间，sds-page电泳表明该基因在大肠杆菌中高水平表达，表达的重组鸡gal-9融合蛋白相对分子质量约为32ku。重组蛋白占菌体总蛋白的40%。表达的重组鸡gal-9融合蛋白以包涵体的形式存在。重组蛋白经纯化后，分别以对数生长中期的大肠杆菌bl21(de3-)株与致病性链球菌cab株为检测菌，利用薄层平皿琼脂糖孔穴扩散法测定了重组gal-9蛋白的抗菌活性，结果表明，重组gal-9对这2种细菌都具有抗菌活性。