长角血蜱保护性抗原基因p27/30的克隆和原核表达

？采用rt-pcr技术首次从孤雌生殖长角血蜱四川株克隆到p27/30基因，扩增序列全长670bp，包含完整的开放阅读框，编码201个氨基酸，预测蛋白相对分子质量为23.38ku。同源性分析表明孤雌生殖长角血蜱中国株与日本株p27/30基因同源性高达99.85％。经rtpcr检测分析，该基因在孤雌生殖长角血蜱的卵、幼蜱、若蜱、饥饿成蜱和饱血成蜱这几个阶段均有表达。将该基因亚克隆后连接到pet32a（+）原核表达载体，转化bl21(de3)宿主菌，经iptg诱导可成功进行表达。表达的目的蛋白大小为24ku左右，与预期大小一致；western-blot显示兔抗长角血蜱全虫抗体能够识别该重组表达蛋白。