猪myd88基因干扰重组慢病毒载体的构建、病毒包装及效果评价

？髓性分化因子88(myd88)作为tlrs/il-1r信号通路中重要的接头蛋白，在免疫应答和疾病防御中起重要作用，作者拟通过慢病毒介导的rna干扰技术获得myd88基因沉默的猪小肠上皮细胞，为致病菌引起肠道疾病机制研究提供有效模型。共构建4个靶向猪myd88基因的shrna表达载体和1个myd88基因高表达载体，通过实时荧光定量pcr方法鉴定瞬时共转染293细胞中myd88基因转录水平，筛选获得干扰猪myd88基因效率最高的shrna表达载体，将其包装成慢病毒载体，用于建立myd88基因稳定沉默的猪小肠上皮细胞。最终成功获得myd88基因沉默效率达到69.3%的小肠上皮细胞，达到基因功能分析的要求。myd88基因稳定沉默猪肠上皮细胞的获得，为猪肠道病原微生物所引起的tlrs/il-1r信号通路作用机制的研究提供了宝贵材料。