不同表达条件对eimeriatenella丙二酰单酰辅酶a：acp转移酶活性的影响

？为探讨不同原核表达载体、不同表达温度对重组表达eimeriatenella丙二酸单酰辅酶a:acp转移酶活性的影响，以生物信息学技术预测的e.tenellaⅱ型脂肪酸合成代谢途径中的丙二酰单酰辅酶a：acp转移酶(etmcat)编码序列为基础，分别设计引物扩增完整orf，采取截除信号肽而保留转导肽以及切除信号肽和转导肽的不同策略，选择pmal-c2x、pet-32a(+)和pproexhta3种不同表达载体分别构建重组表达质粒，转化大肠杆菌rosseta(de3)后，在不同条件下诱导表达，利用酮戊二酸脱氢酶（kdh）偶联系统测定表达产物的酶活性，以评价不同表达策略对表达效果和表达产物活性的影响。表达水平和酶活性分析结果显示，惟切除信号肽和转导肽后的功能蛋白编码区能表达，rosseta(de3)/pmal-c2x-mcat体系的可溶性表达量高于rosseta(de3)/pet-32a(+)-mcat，但二者表达产物的酶活性相似，且均随着诱导温度的降低其可溶性蛋白表达量增加。但rosseta(de3)/pproexhta-mcat体系仅能表达不溶性蛋白，且复性后无酶活性，改变诱导温度对表达效果无明显影响。结果表明不同表达载体和诱导温度对大肠杆菌所表达etmcat的活性及其表达形式有显著影响，其中融合标签和表达温度可能是主要的影响因素，包涵体表达的重组酶即使复性处理仍难达到酶活性分析的要求。