关岭牛myodi基因启动子真核表达载体的构建及其在小鼠c2c12细胞中的表达

？本研究旨在探究关岭牛4个不同长度的myodi启动子的启动活性，初步确定该基因核心启动子位置。采用实时荧光定量pcr技术对关岭牛不同组织中myodi基因的相对表达量进行检测。以关岭牛血液dna为模板，设计5'端加磷的引物，pcr扩增获得4个不同长度的关岭牛myodi启动子，定向精确替换pegfp-n3载体的cmv启动子区，构建重组真核表达载体pegfp-n3-myodi。利用脂质体法将重组质粒瞬时转染小鼠c2c12细胞，依据小鼠c2c12细胞发光的强弱判断myodi启动子的启动活性。结果显示，myodi基因在关岭牛肌肉组织中表达量较高；目的片段成功替换pegfp-n3载体的cmv区；重组质粒能在小鼠c2c12细胞中成功表达，细胞在激发光下发绿色荧光。本研究成功构建了重组真核表达载体pegfp-n3-myodi，4个启动子均具有启动活性，其中p3启动子在小鼠c2c12细胞中表达量最高，初步推断p3启动子为该基因的核心启动子。