霍乱弧菌dncv蛋白的原核表达及活性分析

？dncv（vc0179）是在霍乱弧菌中发现的一种双核苷酸环化酶，其可以合成c-di-amp、c-di-gmp和c-gamp。研究发现c-di-gmp作为胞内的第二信使，通过sting信号通路激活先天性免疫应答。为了体外制备c-di-gmp用于深入研究其功能，构建了vc0179融合cherry标签的丙酸诱导型表达载体，并将该重组表达载体转化至大肠杆菌bl21（de3）中。利用丙酸钠诱导表达后，观察菌体颜色是否为红色判断融合蛋白质的表达。超声破碎细菌后经sds-page电泳检测融合蛋白质的可溶性表达。最后通过ni-ntaagarose亲和纯化重组蛋白质，获得的重组蛋白质进行体外酶促反应，高效液相色谱检测合成产物c-di-gmp。结果表明：成功构建vc0179丙酸诱导型原核表达载体并获得了高纯度的vc0179重组蛋白质。该重组蛋白质通过体外酶促反应可一步生成c-di-gmp。本试验建立了稳定获得具有酶活性的vc0179重组蛋白质的方法；c-di-gmp的体外合成为其后续功能研究及大量制备奠定基础。