猪精氨酸-丝氨酸蛋白激酶1（srpk1）克隆表达及功能初步分析

？本研究旨在阐明猪srpk1基因的分子特点和表达谱。以大白猪为研究对象，利用rt-pcr技术克隆srpk1基因cds区域，同时利用反向pcr（inversepcr，i-pcr）技术得到猪部分srpk1的5′utr序列；利用生物信息学方法分析srpk1基因核苷酸序列及编码蛋白序列的结构特点；利用荧光定量pcr（realtimepcr）检测srpk1在1和30日龄大白猪及杜洛克的心脏、肌肉、脾脏、肝脏、肾脏、肺脏、胃、小肠、大肠、脑的表达情况；构建猪骨骼肌损伤模型，研究在骨骼肌发育过程中srpk1基因的表达特性。结果，将克隆片段拼接得到长2499bp的大白猪srpk1基因序列，包含了1968bp完整cds区域，分析表明其编码含656个氨基酸的蛋白质；包括2个p_kc结构域，猪srpk1蛋白序列与人和黑猩猩的相似性较高。通过生物信息学方法预测所得5′utr含有多个转录结合位点：hsf1、hsf2、ik-1、ik-2、sry、sp1myod、usf、e47、p300、cp2、rreb-1、e2f和ap-1。利用荧光定量pcr研究发现，表达结果显示猪该基因表达具有组织和种间特异性，主要都是在胃、大肠和小肠中表达。srpk1基因在整个损伤修复过程中的表达反复出现升高和降低。5′utr处有多个和肌肉生长相关蛋白的转录结合位点，主要在消化系统组织表达，在骨骼肌修复中表达上调，推测其可能与骨骼肌细胞发育或其他肌肉生长相关因子的表达有关。