鸡朊样蛋白doppel基因的克隆及其与prp^c相互关系分析

？克隆鸡doppel蛋白（chdpl）基因（prnd）并初步分析其与正常细胞型朊蛋白（prpc）的相互关系，为禽源dpl结构与功能、dpl与prpc互作关系机制的研究提供理论依据与分子基础；以多物种dpl氨基酸序列为基础，通过比对找到dpl氨基酸序列保守区，设计简并引物并依据鸡的密码子偏好性对引物进行优化，以逐步降低其简并性。用此特异性引物以聚合酶链式反应（pcr）扩增鸡prnd基因，并将其克隆到pmd-18-t载体，鉴定后将序列上传genbank数据库。结合dpl与prpc相关研究初步分析两者的相互关系；多物种dpl氨基酸序列比对发现，第11—150位（139个氨基酸残基）为dpl氨基酸序列保守区，以此区域设计引物并进行pcr扩增，得到约417bp的目的条带，genbank登录号为kp140962。综合分析prpc与dpl相关研究发现，尽管dpl与prpc具有相似的翻译后修饰和空间结构，但两者多表现为拮抗作用，即prpc能够拮抗dpl的神经毒作用，尤其是其n-端包含八肽重复区的第23—88位残基对于保护purkinje细胞免受dpl诱导的神经退化作用至关重要。禽源dpl的成功克隆不仅填补了目前研究的空白，更在分子水平为后续研究dpl结构与功能及其与prpc的拮抗机制奠定了基础。