悬滴培养法促进鸡胚胎干细胞形成类胚体

？本研究旨在通过悬浮培养法培养鸡胚胎干细胞(embryonicstemcells，escs)，摸索鸡胚胎干细胞形成类胚体（embryoidbody，eb）的最佳方案，以期提高鸡胚胎干细胞体外诱导效率。将鸡escs培养传代至第3代，采用1×104、3×104和6×104ml-13个细胞浓度，使用悬滴培养后，观察类胚体的形成效率。对悬滴培养形成的类胚体进行形态学观察，qrt-pcr检测干细胞标记基因的表达，免疫细胞化学检测相关蛋白的表达，并进行类胚体自分化检测和核型分析。3×104ml-1细胞浓度生成的类胚体数量最高，单个视野下可观察到约267个类胚体，且形成的类胚体大小均一，呈圆球状。qrt-pcr检测结果表明，在类胚体形成48h内，干细胞标记基因nanog、sox2、oct4和c-kit仍维持表达。免疫细胞化学检测显示，该方法形成的类胚体表面抗原检测nanog和ssea-1呈阳性。自分化检测三胚层分化标记基因sox17、sma和tuj-1呈阳性。核型分析显示，悬滴培养形成的类胚体具有并保持正常的核型。鸡escs悬滴培养形成类胚体的适宜细胞浓度为3×104ml-1，且形成的类胚体可分化成3个胚层，用于体外定向诱导过程。本研究建立了鸡escs体外悬滴培养形成类胚体的培养体系，为后期信号通路的体外验证提供试验基础。