猪冷冻精子的细胞凋亡及凋亡途径初步研究

？旨在研究低温冷冻解冻对精子细胞凋亡的影响，并探讨凋亡发生的可能相关途径。采用流式细胞仪检测解冻后精子内的ros水平和tunel染色后的细胞凋亡情况，使用酶标仪检测精子内atp含量，利用相对荧光定量pcr技术检测不同凋亡途径中相关基因的表达量变化。结果表明：冷冻后精子活力、顶体和质膜完整率显著下降（p<0.05）；冷冻精子tunel染色后的凋亡率（80.4%）与新鲜组（9.7%）相比显著升高（p<0.05）；冷冻组精子内ros绿色荧光比率（58.2%）亦显著高于新鲜组（p<0.05）；与新鲜组0.926μmol？l-1的atp浓度相比，冷冻组精子的atp浓度（0.247μmol？l-1）则显著下降（p<0.05）；qrt-pcr检测结果显示，冷冻组中tnf-α、fas、caspase家族、p53和bax基因相对表达量升高，其中fas、p53、tnf-α、caspase-8和caspase-9等相对表达量显著升高（p<0.05）；bcl-2、birc-5、mnsod、cuznsod和survivn基因相对表达量降低，其中birc-5、mnsod、survivn显著降低（p<0.05）。结果表明：低温冷冻解冻会使猪精子细胞发生严重的凋亡，死亡受体外源性凋亡途径和线粒体内源性凋亡途径均可能介导了冷冻后精子的凋亡。