靶向猪atgl基因的mirna预测及鉴定

？本试验旨在初步筛选出调控猪脂肪甘油三酯脂肪酶基因（atgl）的mirna。利用生物信息学分析预测10条靶向atgl基因的猪mirnas，然后通过装载含猪atgl基因3′utr序列来构建pmir-luc报告基因载体，以及通过装载含反向mirna种子区对应的3′utr序列来构建3个突变载体作为阴性对照，以prl-tk载体作为内参，与候选mirna模拟物共转染hek293t细胞，最终利用双荧光素酶报告基因法来检测荧光素酶活性。试验成功构建了含猪atgl基因3′utr序列的重组载体pmir-atgl-3′utr，双荧光素酶报告基因试验显示ssc-mir-769-3p、ssc-mir-1343、ssc-mir-7137-3p、ssc-mir-671-5p、ssc-mir-149能下调293t细胞中pmir-atgl-3′utr的荧光素酶活性，而点突变试验证实了ssc-mir-1343与ssc-mir-7137-3p能通过与猪atgl基因3′utr上预测的种子区结合下调荧光素酶活性。结果表明，sc-mir-1343与ssc-mir-7137-3p通过靶向结合3′utr对猪atgl基因有下调作用。