双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库的构建与鉴定

？构建双峰驼天然重链抗体可变区（vhh）酵母双杂交文库，并对文库质量进行鉴定。采集未经免疫的6月龄雌性双峰驼外周血、骨髓、脾和淋巴结，并从外周血中分离淋巴细胞。抽提总rna，反转录为cdna，用2对引物经过2轮pcr扩增得到400bp左右的双峰驼vhh片段。根据clontech公司mate&platetmlibraryconstructionsystem使用手册，将带有同源臂的vhh片段与线性化的pgadt7-rec质粒共转化y187酵母感受态细胞，转化产物涂布sd/-leu平板，30℃倒置培养3～5d后，收集平板上的所有克隆，即为双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库。对文库的滴度、重组效率及多样性进行鉴定。结果显示，本研究构建的双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库库容为2.07×107，滴度为7.6×108cfu？ml-1。随机挑取47个独立克隆进行菌落pcr鉴定，43个含有vhh片段，重组率为91.5%；选取其中19个测序，均为独立克隆，且多样性好。该研究成功构建双峰驼天然重链抗体可变区酵母双杂交文库，且文库质量满足要求，为进一步获得特定抗原的vhh奠定了基础。