1株绵羊边界病病毒的分离鉴定与序列分析

？对华东地区某羊场采集定点监测的绵羊血液样品进行边界病的感染情况调查。通过rt-pcr方法检测瘟病毒5′-utr基因，发现1只绵羊的血清样品在不同时间检测均为阳性，证实其为边界病病毒（bdv）持续性感染。将该阳性血清样品接种mdbk细胞，进行病毒分离鉴定。通过npro基因rt-pcr扩增、电镜观察、病毒全基因组序列分析，并对分离毒株5′-utr和npro基因进行遗传进化分析。结果显示，该毒株在mdbk细胞上盲传至第8代，不发生细胞病变。rt-pcr扩增获得npro基因预期大小片段，电镜观察以及测序分析表明成功分离出1株bdv，将其命名为jsls12-01。设计覆盖bdv全基因组的6对引物，rt-pcr扩增并测序，该分离株全基因组序列大小为12227bp（genbank登录号为kc963426）。序列比对结果显示，该毒株基因组序列和氨基酸序列与已有bdv分离株之间相似性分别为72.3%~80.4%和80.1%~89.7%。5′-utr和npro基因系统进化分析显示，该分离株与bdv3参考毒株亲缘关系最近，相似性最高分别为87.7%和75.8%。结果证实从绵羊血液样品中鉴定并分离到1株ncp型bdv分离株，经序列分析表明该毒株属于bdv3亚型。