猪带绦虫硫氧还蛋白过氧化物酶的原核表达及其生物学特性分析

？猪带绦虫(ts)是一种重要的人畜共患寄生虫，硫氧还蛋白过氧化物酶(tpx)是猪带绦虫及其幼虫重要的功能蛋白。为研究tstpx蛋白的功能和筛选猪囊虫高效免疫靶标，提取猪带绦虫成虫总rna，经rt-pcr扩增tstpx基因，测序分析后构建原核表达载体pet-30a(+)-tstpx，转化e.colibl21(de3)，iptg诱导表达，用镍离子亲和层析纯化tstpx蛋白并进行生物学特性分析，包括抗氧化功能和抗原性。结果如下：sds-page分析表明，表达的tstpx蛋白约25ku，主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中。抗氧化功能分析表明，在金属催化氧化(mco)体系中，tstpx蛋白对质粒dna超螺旋结构的保护率与质量浓度呈正相关，20μg？ml－1时可100%保护，电泳图谱中被氧化的开环慢迁移带完全消失；h2o2还原体系中，tstpx蛋白对h2o2的还原率与质量浓度呈正相关，100μg？ml－1时，在含二硫苏糖醇（dtt）体系中，还原率达69.9%，在不含dtt体系中为54.5%。抗原性分析：westernblotting显示tstpx蛋白可被猪带绦虫囊尾蚴阶段阳性血清识别，具有良好的反应原性；用tstpx蛋白免疫家兔，间接elisa检测的抗体效价高达1∶320000，具有良好的免疫原性。本研究表达的tstpx蛋白具有生物学活性和良好的抗原性，为进一步阐明其生物学功能和研制猪囊虫病疫苗奠定了基础。