ABLSH3-T79Y突变体联合伊马替尼对慢性粒细胞白血病细胞增殖的影响

目的　分析慢性粒细胞白血病(CML)BCR-ABL蛋白的SH3结构域突变体(ABLSH3-T79Y)联合伊马替尼(IM)在体内外对CML细胞增殖的影响，并初步探讨其发挥作用的机制。方法　构建重组腺病毒载体SH3-T79Y突变体，将其联合IM处理K562/G01细胞后，采用克隆形成实验检测细胞克隆形成率，流式细胞术检测细胞周期，分析K562/G01细胞体外增殖能力的变化。SH3-T79Y联合IM处理KCL22细胞，构建BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型，计算皮下瘤形成率，摘取瘤体进行病理学检查，分析KCL22细胞体内增殖能力的变化。SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后，采用Westernblotting检测p-BCR-ABL、BCR-ABL、p-CrkL、CrkL、CyclinD1蛋白的表达水平，分析联合作用影响CML细胞增殖的机制。实验中以PBS、腺病毒空载体及IM单独处理细胞作为对照。结果　相较于三个对照组，SH3-T79Y联合IM处理K562/G01细胞后，细胞克隆形成率(28.74%±6.64%)明显降低(P＜0.05)，细胞周期阻滞于S期。联合处理KCL22细胞后，KCL22-BALB/c裸鼠皮下实体瘤模型成瘤率为16.7%，明显低于IM单独处理组(33.3%)和PBS对照组(100%)，瘤体病理学检查见大量增殖的瘤细胞；Westernblotting检测结果显示联合处理后K562/G01细胞p-BCR-ABL、p-CrkL、BCRABL、CrkL及CyclinD1的表达均降低。结论　SH3-T79Y联合IM通过抑制BCR-ABL、CrkL磷酸化和降低CyclinD1表达，在体内、体外发挥了抑制CML细胞增殖的效应。