小鼠小肠干细胞谱系追踪方法的建立及其在放射损伤中的应用

目的　利用Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠建立谱系追踪方法，用于观察Lgr5+小肠干细胞在小肠组织更新中的作用，并研究辐射对小肠干细胞组织重建的影响。方法　通过基因型分析鉴定Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠。他莫西芬诱导小鼠体内的荧光蛋白表达，激光共聚焦显微镜观察诱导后小肠干细胞的分化。采用60Coγ射线(15Gy)照射Lgr5-EGFP-CreERT2/ROSA26-stop-EYFP小鼠，观察辐射对小肠干细胞组织重建的影响。结果　提取鼠尾DNA通过PCR方法鉴定Lgr5基因(174bp)，获得双阳性小鼠。他莫西芬(100mg/kg)单次诱导后，激光共聚焦观察到Lgr5+小肠干细胞在诱导后5d开始分裂，7d已到达绒毛顶端，14d少量绒毛全部带有荧光，45d更多的小肠绒毛中存在荧光细胞，而且更加稠密。但在15Gy照射后小鼠小肠绒毛脱落严重，隐窝处没有荧光出现。结论　成功建立了小肠干细胞谱系追踪模型，并初步观察了辐射对小肠干细胞损伤的影响。