分化抑制因子1对鼻咽癌细胞增殖的影响及其途径

[摘要]　目的　探讨分化抑制因子1(Id1)对鼻咽癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制。方法　体外培养人鼻咽癌细胞NP69、CNE1。合成Id1小分子干扰RNA(siRNA)，构建Id1表达载体并分别转染鼻咽癌细胞NP69、CNE1。收集Id1siRNA及对照质粒Scramble转染72h的NP69细胞(分别命名为NP69si-Id1、NP69-NC)，pcDNA3.1-Id1及对照pcDNA3.1转染48h的CNE1细胞(分别命名为CNE1-Id1、CNE1-Vector)，采用RT-PCR及Westernblotting检测Id1的表达情况。采用MTT法比较顺铂(DDP)对NP69si-Id1、NP69-NC和CNE1-Id1、CNE1-Vector增殖的影响。采用CalcuSyn软件计算各组细胞对DDP的IC50值。将1μg/mlDDP与鼻咽癌细胞共同孵育24h后，采用Westernblotting检测凋亡蛋白Caspase-3、Bax、Bad的表达及蛋白激酶B(Akt)Thr308和Ser473的磷酸化情况。结果　与NP69-NC比较，NP69si-Id1的Id1mRNA和蛋白水平明显降低；与CNE1-Vector比较，CNE1-Id1的Id1mRNA及蛋白水平明显升高。NP69si-Id1细胞对DDP的IC50值(0.207±0.008μg/ml)明显低于NP69-NC(0.405±0.009μg/ml，P<0.05)，CNE1-Id1细胞对DDP的IC50值(0.671±0.012μg/ml)明显高于CNE1-Vector(0.445±0.008/ml，P<0.05)。Westernblotting检测结果显示，与NP69-NC比较，NP69si-Id1的Caspase-3断裂带增多，AktThr308和Ser473磷酸化减少；与CNE1-Vector比较，CNE1-Id1的Caspase-3断裂带减少，AktThr308和Ser473磷酸化增加。结论　Id1可促进鼻咽癌细胞的生长，抵抗DDP诱导的细胞凋亡，其机制可能与增加Akt磷酸化有关。