创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌快速定量检测方法的建立及应用

［摘要］？目的？建立检测创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的实时荧光定量PCR方法，为气性坏疽的早期快速诊断提供新手段。方法？以产气荚膜梭菌16SrDNA基因序列为模板，在其保守区域设计特异性引物及探针，以PCR扩增产物重组质粒作为定量检测的标准品，绘制标准曲线。对荧光定量PCR体系和反应条件进行优化，并验证方法的特异性、敏感性、重复性及临床应用的可行性。结果？所建立方法检测产气荚膜梭菌具有高度特异性，与创伤弧菌等23种相关细菌均无交叉反应。检测灵敏度以纯菌计达9×102cfu/ml，相当于9cfu/反应。反应体系具有很高的稳定性。整个操作过程仅需3h。5例创伤可疑分泌物样本的荧光定量PCR检测结果与细菌培养完全一致。结论？本研究建立的实时荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速，可用于创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌？的日常检测以及战时和突发事件时的批量应急诊断。