慢病毒介导的绿色荧光蛋白转基因小鼠的制备及鉴定

？目的？以携带绿色荧光蛋白（GFP）的慢病毒为载体制备转基因小鼠，建立慢病毒介导的转基因动物制备技术平台。方？法？？将慢病毒表达载体FUGW与ViraPowerTM？？？LentiviralPackagingMix按1∶2比例混合，用Lipofectamine？？？TM？？？2000转染293FT细胞，包？装出的病毒经浓缩后以293T细胞测定病毒滴度。采用受精卵卵周隙显微注射的方式制备转基因小鼠。出生小鼠用PCR法检测？GFP基因整合情况，并在荧光体视显微镜下鉴定外源基因的表达情况。结果？？病毒包装过程中，转染后24h即可见GFP表达，72h时？293FT细胞的转染效率达95%以上，镜下可见大量绿色荧光。包装出的慢病毒滴度为10？？？6？？U/ml，经浓缩后可达10？？？8？？U/ml。PCR检测？显示，F？？？0？？代小鼠GFPPCR阳性率为70.27%（26/37）。荧光体视显微镜下观察荧光小鼠所占比例，F？？？0？？代为65.2%（15/23），F？？？1？？代为？55.0%（11/20），荧光强度在两代个体中相当。F？？？0？？代、F？？？1？？代中GFP均呈广泛表达。结论？？制备出携带GFP可传代的转基因小鼠，建？立了慢病毒载体介导的转基因小鼠制备技术平台。？？？？